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我花了半个月反反复复纯化蛋白,隔壁实验室几天就搞定了?

日期:2022-11-19 05:38
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摘要:我花了半个月反反复复纯化蛋白,隔壁实验室几天就搞定了?

原本计划做好实验放飞(fei)自我,数据(ju)却一(yi)直出不来,别人做蛋白纯化(hua)几天搞定,我做蛋白纯化(hua)只能靠手动,半(ban)个月(yue)反(fan)反(fan)复(fu)复(fu)结果依(yi)旧让人...


只好请教老板,如何快速搞定蛋白纯化实验(文末有法宝,亲测管用!!!)


我:「老师,我选择的是凝胶过滤色谱法,我的目标蛋白电荷密度并不高,上样的量也不大,但分辨率就是不高,而且有好多成分我还是想回收一下但做不到。图片 」

老师:「分辨率不高这个问题,首先样品与(yu)洗脱料液(ye)比应(ying)该保持一致,其次要再检查一下色谱柱(zhu)装填是否匀实了,这些都会影响分辨率。层析液全收集这个事儿是这样,咱现在的仪器通路是有限的,只能收集这么多,你就尽量挑你关注的来吧。」



我:「行吧,那实验过程中会出现浑浊现象,这个是什么原因呢?」

老师:「有可能是你实验的蛋白自身不稳定,需要检查缓冲体系是否适宜,环境是(shi)否温度太(tai)高(gao),你可以加入肌氨(an)酸(suan)钠,迅速使蛋(dan)白变性,浑浊现象会消除。」



我:「老师,还有,还有问题,这个仪器镍柱好像堵了,每次开机要启动好久,基线还漂移的很过分,平衡的时间越来越久,一上午都耗在等机子上了。」

老师:「这个机器的镍柱是刚换的,如果你样品杂质颗粒处理的比较好,液料比也合适的话,就要看纯化上清时蛋白质有没有产生絮状沉淀(dian),尽快加入(ru) DTT 还(hai)原。至于基线花长时间都不平的问题啊,同学们给我反映很多次了,但仪器用的太久了,我也很无奈。」



我:「老师,我以前一直以为是我没有找到软件,怎么自动换算 AU 值,结果发现大家都是手动自己算的。」

老师:「咱的这台仪器都『老当益壮』这么久了,电脑也卡,启动也慢,啥都得手动,但是换一台全自动进口的实在是太贵,公共实验室地方紧紧巴巴,便宜一点的吧,全是手动也不划算,跟学院申请了很多次了,经费也有限,确实挺为难的。」



我:老师还是厉害啊,但是 3 天要搞定实验,实在有点为难,要如何才能搞定呢?

老师(shi):虽然我平时扣扣搜搜的,那也是没办法,这次我给你们特别准备了一台全自动蛋白纯化仪,完全满足你们日常使用,胜任常规蛋白纯化~



我:全自动!!!



老师(shi):你赶紧扫下二维码去试用吧(ba),用(yong)的好就买,这台仪器费用(yong)还(hai)(hai)可以,为师还(hai)(hai)有(you)些经费能支持。


这台能入(ru)我老板(ban)法眼(yan)的(de)蛋白纯(chun)化仪(yi)究竟有何来历:


Blupadstart 蛋(dan)白(bai)纯(chun)化(hua)系统(tong)

Blupadstart 蛋(dan)白纯(chun)化(hua)系统,小巧紧凑的(de)一(yi)体化(hua)设(she)计(ji),能够开展(zhan)各种(zhong)常用(yong)的(de)纯(chun)化(hua)技(ji)术,如亲和(he)层析、离子交换层析、脱盐(yan)和(he)缓冲液(ye)交换,以及凝胶过(guo)(guo)滤,通过(guo)(guo) Blupadstart、预定义(yi)(yi)模(mo)板或自(zi)定义(yi)(yi)方法实现全自(zi)动多蛋(dan)白纯(chun)化(hua),操作界面简洁(jie),流程直观(guan),满足科研需求的(de)同时让(rang)一(yi)切(qie)简单起来:


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  • 兼(jian)容所有层析填料Size Exclusion(SEC)-分子筛、凝胶过滤,(HIC和RP)-疏水和反相均可上乘适应

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